我们已经用THP-1单核细胞衍生的巨噬细胞工作了几个月（以刺激胆固醇摄取），但这些细胞非常脆弱，在大多数情况下，我们没有达到足够数量的实验结束。细胞（有时，我们最终没有任何细胞）。

我们慢慢融化THP-1单核细胞，在DMEM + FBS 10％中培养7天达到融合，然后我们将它们分化为PMA 200 nM的巨噬细胞（遵循先前的文献和我们之前的测试所示）。但是，从这一点开始，它们开始逐渐死亡，特别是当它们与胆固醇（氚标记的胆固醇）接触时，但是在它们接触之后。

我不知道问题出在哪里，也许：

- PMA诱导的巨噬细胞分化不足

- 错误的文化媒体

- 洗涤太多（在整个过程中，我们用温PBS洗涤它们6次，我们更换培养基3次，以改变条件）

- 细菌污染（我不知道如何检测它）

- 过于激进的治疗（氚化胆固醇）

简而言之，THP-1单核细胞衍生的巨噬细胞通常会死得太多，或者是否有任何“实用技巧”可以用来保持它们存活和代谢活跃？有没有什么技巧可以帮助这些细胞更长寿？

从我的角度来看，在我手中，THP-1细胞绝不是脆弱的。

您必须将培养基更换为RPMI 1640.我们使用RPMI 1640（PAA目录号E15-840）补充了10％FCS Gold和0.1 mg / ml青霉素/链霉素/ L-谷氨酰胺（PAA）多年。我们用100 ng / ml PMA进行分化96小时，加上不同时期的化合物孵育。该方案工作正常，我们通过流式细胞仪仅检测少数坏死或凋亡细胞（至少不超过其他细胞）。

不太严格的洗涤也可能有帮助。我们通常在星期一和星期五分裂细胞（没有洗涤或中间变化）。

另一个重要参数是细胞密度。如果在分化期间细胞密度太小，则细胞表现不同并且不太方便处理。确保在下列密度附近种植细胞。还请注意培养基的体积是否充足。并且再次说明：在分化过程中没有洗涤和没有改变介质。

24孔培养板

每孔0.38 * 10 ^ 6个细胞

每孔2毫升培养基

6孔培养板

每孔1,5 * 10 ^ 6个细胞

每孔3毫升培养基

25cm2培养瓶

每瓶3,3 * 10 ^ 6个细胞

每瓶5ml培养基