| 问题/原因 | 解 |
|---|---|
| 从库存中解冻后没有或几乎没有活细胞 | |
| 股票状态质量很差 | 确保用于产生原种的起始培养物已被正确鉴定，并且是健康的，没有微生物污染，并且在生长的对数期后期（80-90％汇合）。 轻轻收获细胞以防止损坏。 |
| 细胞冻存不正确 | 在液氮中冻存时，确保细胞，培养基和其他试剂 的浓度-以及冷冻方案-遵循供应商的建议。通常，细胞冻存应该以每分钟约1至3℃的速度缓慢进行，以使冰晶形成最小化。 使用电子可编程或机械冷冻装置，以确保一致和适当的冷冻速度。为细胞 选择最合适的细胞冻存液。如果使用甘油，请不要将其存放在光线下，因为光照会将甘油转化为细胞毒性丙烯醛。 |
| 细胞冻存不正确 | 冻存应始终保持在-130°C以下的温度，最好是在液氮中，以确保最大的生存能力。在液氮上方的气相中储存优选储存在液体本身中，因为如果液氮泄漏到冷冻管中，则在解冻期间存在小瓶爆炸的风险。 |
| 细胞复苏不正确 | 复苏细胞时，请遵循供应商推荐的方案。通常，细胞应快速解冻。使用预热的媒体。 尽快去除含有细胞冻存液的培养基，以防止活力降低。 确保小心处理细胞。不要高速涡旋或离心，因为细胞在冷冻保存后特别容易受损。 |
| 从库存或传代解冻后细胞贴壁不良 | |
| 塑料容器上静电积聚（湿度低时尤其有问题） | 增加室内湿度。 用（消毒的）湿毛巾擦拭培养皿外。 使用防静电装置。 |
| 细胞，培养基和/或其他试剂的混合不充分 | 确保细胞和所有试剂的溶液充分混合。 |
| 滚瓶的旋转速度太快 | 以较慢的速度旋转瓶子。 |
| 细胞生长缓慢 | |
| 细胞传代次数过多 | 获得已经传代培养较少次数的新细胞。 |
| 收获时细胞太融合 | 从新的细胞储备开始，在生长的对数期收获，然后达到100％汇合。 |
| 培养基，血清，缓冲液等质量差或配方不正确 | 丢弃当前试剂并使用新批次。 |
 CO 2电平不匹配是什么媒体的碳酸氢盐缓冲系统需要被使用，从而导致控制pH值不足 | 确保培养箱CO 2 水平与缓冲系统所需的水平相匹配。通常，缓冲液中碳酸氢盐的浓度越高 ，培养箱气体混合物中所需的CO 2浓度越高。 |
| 微生物（尤其是支原体）污染 | 有关 预防和消除微生物污染的详细最佳实践，请参阅 污染问题。 |
| 将培养物暴露于荧光下会使光敏介质成分（核黄素，色氨酸和HEPES）转化为细胞毒性自由基和H 2 O 2 | 将细胞和培养基存放在黑暗中，远离荧光灯。 |
| 不准确的细胞计数方法导致假定的细胞生长不良 | 确保计数样品充分混合，以避免细胞密度的局部变化，从而影响细胞计数的准确性。 使用血细胞计数器的手动方法重新检查用于确定计数的所有计算，或考虑自动细胞计数。 |
| 细胞生长不均匀 | |
| 容器内不均匀的细胞生长表明细胞和/或培养基的混合不充分 | 确保通过温和的涡旋或移液将细胞混合物和所有试剂适当混合，以避免局部浓度变化。 |
| 在同一时间生长的可能相同的血管之间的不均匀细胞生长可能是由于培养箱内的温度变化 | 尽可能避免将培养皿堆叠在一起，因为底部的容器最靠近金属架，并且可以最快地加热。 当储存在孵化器前部的容器比后部储存的容器生长较少时，请注意尽可能保持孵化器门关闭，并将容器向后移动。 |
| 具体增长模式： | |
| 培养箱中蒸发不均匀导致培养基体积减少和多孔板外孔生长不良 | 保持水库充分加湿CO 2和其他传入的气体。如有必要，在孵化器中创建一个蒸发“热点”的地图，以避免在随后的实验中。 |
| 孵化器振动导致同心环（在餐具中），平行条或不规则图案（在烧瓶中） | 将孵化器放置在坚固的表面上，而不与低流量区域的其他设备共用。尽可能远离其他电动设备。 |
| 由于架子的金属比周围区域提供更多的热量，因此稍微过高或稍微过低的培养箱温度会分别导致点状或交叉影线的图案。细胞密度较高的点表明不与金属接触的细胞生长更好; 交叉影线表明细胞更喜欢温暖的区域而不是金属。 |  根据需要调整培养箱温度，注意尽量减少培养箱打开的时间，从而导致热量损失。装有介质的假容器也可用于隔离与货架的接触。 |
| 非水平的培养箱架可导致不均匀的细胞密度 | 在使用之前，以及在孵化器清洁和维修之后使用水平搁板。 |
| 培养基中存在气泡导致清晰的条带（在滚瓶中），没有细胞生长的斑点（在烧瓶和餐具中） | 小心地倒入或移取介质以避免气泡。 |
| 冷凝导致垂直条纹（在滚瓶和烧瓶中） | 不要让容器暴露在培养箱外的较冷温度超过必要时间。使用前立即从培养箱中取出容器。 |
| 太小的介质体积沿着餐具和烧瓶的侧壁产生增加的细胞密度环。这是由于弯月面的曲线在烧瓶或井的中心形成了介质贫乏区域。 | 向培养皿中加入足量的培养基。一般准则是每cm 2生长区域0.2-0.3mL培养基 |
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