听说同学们的养的细胞常常因为各种原因一再受损或者死亡，今天小秋拿出毕生功力，为大家讲述细胞培养中那些你可能忽略的小细节

细胞的营养来源

针对大多数肿瘤细胞，营养配方一般为：90%合成培养基(DMEM、RPMI1640、MEM等)和10%胎牛血清(FBS);为了防止污染，可以加1%双抗!

常见问题解答：

Q：针对不同细胞，细胞培养基配方一样吗?如何获知呢?

A：不同细胞的培养基是不同的。在小秋家购买的细胞，针对不同细胞株，会有详细介绍，包括生长的状态图、培养基的类型等。

Q：培养基为什么一般都是偏红色?

A：因为培养基加了酚红来显示颜色，指示pH范围为6-8，颜色会由黄变为紫红。这是为了我们能更直观观察培养液的变化，如变黄，则代表偏酸，偏碱性了就显示偏紫色。一般来说，细胞吸收营养后，变黄后就暗示我们要换培养基啦!所以密切观察很重要哦!

Q：大多数细胞系可以在不止一种培养基中生长，那可以替换吗?

A：不建议更换指定的培养基，因为当培养基改变时，细胞的性质可能也会变化。

Q：若是细胞生长缓慢，是否可以增加血清比例?

A：可以!

细胞的生长环境舒适无菌的环境是细胞健康成长的基础。如下图为培养细胞的器皿，包括形状、规格、用途多样的培养瓶、培养皿及培养板。最终住进37℃，5%CO2的恒温培养箱。常见问题解答：

Q：细胞培养板规格不一，如何正确选用?
A：根据不同规格的细胞培养皿/板容量及用途，如流式一般用 6 孔，爬片一般用 24 孔，MTT 一般用 96 孔等。

Q：细胞培养皿和培养瓶区别?
A：就细胞培养状态来说，培养瓶和培养皿没有太大区别，主要在于安全系数(培养瓶>培养皿)、培养细胞数量(大培养瓶>培养皿)。但是培养瓶成本也会相对较高，因此无特殊要求，一般选择培养皿即可。

细胞的复苏与冻存
细胞复苏：指将冻存的细胞解冻之后重新培养，细胞恢复生长的过程。复苏过程如下图所示：

常见问题解答：Q：为什么细胞复苏后，很多难以贴壁?
A：忽略培养基的问题，主要考虑细胞冻存时状态差或者复苏时动作太慢导致细胞死亡。切记最重要的融化速度要快，可不时摇动冷冻管，使之尽快通过最易受损的温度段(-5～0℃)。Q：为什么细胞贴壁了，却长不起来?
A：此时需要考虑的是细胞密度问题，一些细胞倾向于维持一定的密度，若复苏的细胞生长缓慢，可将细胞转移到较小的培养瓶/皿中培养。

细胞冻存：将细胞放在低温环境(-70℃~-196℃)，细胞内的代谢降低，可最大限度的保存细胞活力，以便长期储存。

常见问题解答：
Q：目前细胞冻存液多采用的什么配方?

A：目前细胞冻存液的配方有很多种，如培养基：血清：DMSO=7:2:1或8：1：1或5：4：1，或直接用血清：DMSO=9:1。 这里小秋推荐使用HAKATA无血清细胞冻存液，无需程序降温，细胞存活率和活力高达90%-98%，适用于干细胞冻存及无血清培养细胞。

Q：若没有细胞冻存盒，我们该怎么办?

A：可先将冻存管放入4℃冰箱中10min，再移至-20℃冰箱30min，-80℃冰箱2h或过夜，最后放入液氮罐内。为了节约时间，还可直接在冻存盒外包裹一团棉花，用棉花代替冻存盒缓慢降温的特点，将细胞转移至-80℃冰箱过夜，再转移至液氮保存。

Q：细胞冻存时对细胞量有要求吗?

A：细胞复苏时会有一定的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，起始浓度106—107个/ml/管;

今天的内容就到这里了，细胞培养中的细节可马虎不得，希望大家可以结合这些小技巧，将细胞养的更漂亮！

按照国际惯例，文末是时候放大招了：

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好了各位同学们，

为了能让你们毕业，小秋也是费尽了心思，

但我也只能帮你们到这里了，

至于能不能毕业，就靠你们自己了...

你们懂我意思吧？