最近，小编的细胞总是处于无休止的污染，污染，复苏和再污染的循环中。

我相信有一个以上的童鞋有这样的麻烦，所以今天我们将讨论细胞污染的问题。

首先，您需要知道什么是细胞污染 - 任何对细胞生长有害的成分或导致细胞不纯的异物都被视为污染。根据污染源，细胞污染可分为化学污染，物理污染和生物污染。

一是化学污染

用于细胞培养的培养基用高压蒸汽灭菌。其中，血清是细胞培养中常用的培养基，血清中存在潜在的化学污染。此外，血清成分不确定，血清对不同细胞的生长有不同的影响，包括毒副作用。

二是物理污染

物理污染主要是指通过温度，振动，辐射和辐射等物理因素破坏细胞。细胞培养基等暴露于辐射或紫外光引起细胞代谢的改变。

恒温培养箱周围有设备产生机械振动，也可能对细胞生长有影响。

三，微生物污染（这是我们经常遇到的）

细菌：

常见的污染物之一，如大肠杆菌和葡萄球菌，是常见的细菌污染。细菌污染很容易找到。当培养的细胞被细菌污染时，培养液将变浑浊并且pH将改变。还有少量的培养液通过肉眼观察而没有太大变化，细菌只能在显微镜下找到。

如果您正在饲养自己的细胞，建议您每天查看它们。

解：

1）无论什么污染，只要细胞被污染，如果不是非常珍贵的细胞，丢弃并重新培养。

在这里进行再培养时，要注意自己细胞的污染状况。如果它在传递时被污染，则取决于受污染的光盘数量。如果全部污染，那么所有的东西都被更换，先取出试剂。原因是，等待您停止污染，您可以尝试使用原始试剂。

如果更换试剂或污染，则需要清洁培养箱和房间;如果是污染之一，可能是你自己操作的原因，下次需要多加注意，

通常，我们只需要在需要使用它们时提高细胞。它很少用于练习我们的手。因此，污染的第一时刻是确保下一个细胞不会污染，然后细胞被提升并慢慢找到原因。

2）如果细胞非常稀少，需要保存珍贵细胞，建议配置含有10倍双抗体PBS和5倍双抗体的完整培养基。然后用10倍双抗体PBS洗涤细胞5-10次。

然后，细胞用5倍双抗体完全培养洗涤3次以上，培养后每1小时更换一次，最后培养过夜2倍双抗体培养基，替换为双抗生素完全培养基。第二天。培养，传代两次以上，如果没有发现污染，可将其冷冻，并使一些细胞在没有抗生素的培养基中继续培养超过48小时，最后确定细胞不含污染物。

菌：

其中一种常见的污染物是曲霉菌，白色念珠菌，酵母，黑霉病，孢子，并且在雨季更容易受到污染。现在我们正处于雨季，真菌也来了。

真菌生长相对缓慢，并且在疾病开始时对细胞生长没有太大影响。首先，如果只是观察细胞，可能会被忽略，但经过很长一段时间后，细胞的活力会变差。培养基是透明的，不会改变颜色。其中可以看到白色或浅黄色的浮动物体。在显微镜下还有丝状，管状，树枝状或椭圆形物质。念珠菌和酵母菌株呈椭圆形。当你看到明显的菌丝时。

解：

1）因为霉菌有孢子，所以酒精，清洁和熄灭，紫外线等不可能去除霉菌！上面的第一个，不重要，立即处理。或与其他细胞分离，更换所用的实验室设备和试剂。

2）最好防止真菌，用硫酸铜溶液擦拭CO2培养箱，并在水盘中加入饱和量的硫酸铜。

3）将饱和消毒的磷酸氢二钠高盐液加入培养箱的托盘中，以防止霉菌污染。

4）应定期（1月左右）清洁孵化器，特别是在雨季。

5）为防止霉菌污染，在培养基或放线菌素D或双抗体中加入3ul / ml两性霉素或制霉菌素。

6）最重要的是培养良好的无菌概念，避免将培养基洒入培养箱和生物安全柜。这些培养基洒在培养箱中，为细菌和真菌的繁殖提供了良好的条件。

7）如果被污染，将所有细胞从受污染的CO2培养箱中转移出来并用过氧乙酸（所有，特别是四个角落）清洗培养箱。将过乙酸置于培养箱中1小时以使蒸汽充满。在过乙酸的气味消散后，将其转移到细胞中。

8）彻底消毒环境。整个培养室用福尔马林和高锰酸钾熏蒸。用苯酚洗涤培养箱内部，包括托盘，密封2天。

9）一旦细胞被污染，就很难保存。即使使用制霉菌素或放线菌素D，它也是一种伤害敌人10,000的方法。高浓度的抗真菌剂对细胞有毒。

如果发现新的污染，pbs洗几次细胞，尽可能洗涤细菌，然后用两性霉素25ug / ml处理12-24小时，改变溶液后改变两性霉素3-5ug / ml，改变每天连续液体，连续处理2-3天后，继代培养后，稍微接种到35mm培养皿中，不含两性霉素，观察霉菌是否继续生长，剩余的传代细胞继续加入两性霉素直至不是细胞添加没有霉菌生存。 。

黑胶虫：

它可以穿透过滤膜或通过空气传播。在低倍率下是黑点。黑虫可以在高放大倍数下游泳和游泳。一般来说，它不会影响太多。仍然可以使用细胞。的。通常，细胞生长状态良好，观察到的移动物体没有显着增加，并且培养基的颜色和透明度没有显着改变，并且在同一批血清培养细胞中可以发现类似的现象。它对细胞生长状态没有显着影响，并且在细胞增殖旺盛后自然消失，除了更换血清外不需要特殊处理。

可能的污染原因：可能有许多原因，如液体消毒，操作问题，环境问题等。

定期预防污染：

1，在培养基中加入双抗体，预防量可以，10ul / ml。然而，双抗体会影响细胞的状态，因此有必要在转染前去除双抗体并检测细胞的某些指标，以避免影响实验结果。

2，培养箱应定期或紫外线消毒，培养箱应用酒精和解结器进行检测。培养箱中的水优选为三蒸水。

3，超净平台物料提取设备培养液瓶操作必须按规定操作，不要随意操作，快速，频繁地四处走动。

4，超洁净平台的风扇不能太大，风扇要6-8格。否则也可能导致霉菌污染

5.无菌室用甲醛熏蒸后，可用相同量的氨水中和，可在约数小时内操作。

6，操作人员个人原因：这是最可预防的，在使用设备之前必须检查解决方案是否可用，是否过时，如果您是过时的，请不要冒险，请务必重新消毒或定期治疗，特别是有时没有面罩，手套，并且在操作时大声说话是最不合适的。

最后，小编想说：

细胞污染，预防是硬道理！ ！ ！不要考虑补救措施，失去两者并不是一个好主意，最重要的是预防！预防！预防！ ！ ！