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小鼠伽马干扰素(高敏)ELISA试剂盒Mouse IFN-γ ELISA KIT(high sensitive)
货号:HM-032
价格:¥3800.00
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小鼠伽马干扰素定量分析酶联免疫检测试剂盒(高敏)

 

本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IFN-γ浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整,如有产品包装破损或质量投拆,请在收到货一个月之内联系我们。

 

IFN-γ简介:

被称为II型干扰素的IFN-γ,是由143个残基构成的,有20和25kDa亚型的糖蛋白,以头尾相连的同型糖蛋白的形式存在。

IFN-γ由T淋巴细胞和NK细胞产生,用以抗病毒和干扰增殖,此外,IFN-γ还有与免疫调节相关的几种功能包括调节细胞的增殖和程序性死亡,刺激或抑制不同基因的表达。

IFN-γ能通过诱导产生吲哚胺2,3-双加氧酶来抗弓形虫和衣原体的感染。IFN-γ是效应强烈的单核吞噬细胞增强剂,IFN-γ是通过增强单核吞噬细胞的Mac-1的表达来达到增强胞饮作用和吞噬作用的。IFN-γ通过增加巨噬细胞的氧自由基和TNF-α的释放来达到增强杀肿瘤细胞的作用。IFN-γ选择性地提高包括因LPS刺激的B细胞的IgG2a和因2T细胞呈递抗原而引起的B细胞的IgG3的释放量。有报道称IFN-γ能引起细胞的自分泌IFN-γ作用的增强。

 

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠IFN-γ的浓度。小鼠IFN-γ捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标本或参考品时,其中的小鼠IFN-γ会与捕获抗体结合,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠IFN-γ抗体后,抗小鼠IFN-γ抗体与小鼠IFN-γ接合,形成夹心的免疫复合物,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合,亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来;其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂,若样本中存在IFN-γ将会形成免疫复合物,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测,读其450nm处的OD值,小鼠IFN-γ浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中小鼠IFN-γ浓度。

 

小鼠IFN-γ定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:

组分

规格(96T/48T)

小鼠IFN-γ预包被板(高敏)

12条/6

标准品稀释液

10ml/5ml

小鼠IFN-γ标准品

4支/2支(冻干)

小鼠IFN-γ生物素化抗体(高敏)

10ml/5ml

亲和素连接的HRP酶

10ml/5ml

浓缩洗涤液 20×

30ml/15ml

TMB底物

10ml/5ml

中止液

5ml/3ml

封板胶纸

3/2

说明书

1

标本收集:

1.标本的收集请按下列流程进行操作;

A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可;

B.血清标本应是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液;

C.血浆标本,推荐用EDTA的方法收集

D.若待测样本不能及时检测,标本收集后请分装,冻存于-20℃,避免反复冻融。

2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂;

3.标本应清澈透明,检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。

4.请勿使用溶血,高血脂或污染的标本检测,否则结果将不准确。

 

注意事项:

1.试剂盒请保存在28℃。

2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶,请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

3.标准品复溶加样后,剩余部份请丢弃。

4.底物请勿接触氧化剂和金属。

5.加样时,请及时更换枪头,避免交叉污染。

6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。

7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要,在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。

8.室温反应,请严格控制在25~28℃。

9.洗涤过程是至关重要的,洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。

11.加样过程中避免气泡的产生。

12.血清和血浆标本的检测时,检测抗体的孵育时间应适当延长。

 

检测前准备工作:

1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温(25-28℃)平衡20分钟;每次检测后剩余试剂请及时于2~8℃保存。

2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)

3.如有5X标准品稀释液,请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水)

4.标准品: 按标签复溶体积加入标准品稀释液复溶使IFN-γ终浓度达到400pg/ml,室温反应,请严格控制在25~28℃,静置15~20分钟后轻轻混悬(建议抽吸几次)待彻底溶解,用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。(标准曲线取七个点,最高浓度为400 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.)

图片2.png 

洗涤方法:

自动洗板机或人工洗板:每孔洗涤液为300ul,注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。

 

实验过程需自备的材料:

1.不同规格的加样枪及相应的枪头;   

2.酶标仪;

3.自动洗板机;                     

4.去离子水或双蒸水;

 

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数,取出所需板条放置在框架内,暂时用不到板条请放回铝箔袋密封,保存于4℃。

2.建议设置本底较正孔,即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。

3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中,用封板胶纸封住反应孔,室温(25-28℃)孵育120分钟。4.洗板5次,且最后一次置厚吸水纸上拍干。

5.加入生物素化抗体工作液(100ul/)。用封板胶纸封住反应孔,室温(25-28℃)孵育60分钟。   

6.洗板5次,且最后一次置厚吸水纸上拍干。

7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/)。用封板胶纸封住反应孔,避光室温(25-28℃)孵育20分钟。

8.洗板5次,且最后一次置厚吸水纸上拍干。

9.加入显色剂TMB100ul/孔,避光室温(25-28℃)孵育20分钟。

10.加入中止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。

 

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效,复孔的值平均后可作为测量值。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。

3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

4.若标本OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。

 

典型数值和参考曲线

浓度pg/ml

典型OD1

典型OD2

OD平均值

0

0.092

0.104

0.098

12.5

0.212

0.284

0.248

25

0.366

0.402

0.384

50

0.636

0.676

0.656

100

1.025

1.109

1.067

200

1.617

1.741

1.679

400

2.349

2.785

2.567

小鼠IFN-γ参考标准曲线

图片1.png 

注意:本图仅供参考,应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。

 

灵敏度,特异性和重复性:

1.灵敏度:多次重复结果表明,最小检出量为1.8pg/ml

2.特异性:与人IFN-γ和大鼠IFN-γ没有交叉反应。

3.重复性:板内,板间变异系数均<10%.

 

参考文献:

 uziel and Greene, 1990  J. Invest. Dermatol., 94:275

 Parkinson et al., 1988  J.  Immunol. Methods, 15:105


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